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乳制品激素检测广泛应用的技术-酶联免疫法

发布时间:2019-04-15 09:29:26 浏览量:59

乳制品激素检测广泛应用的技术-酶联免疫法

激素是由内分泌腺或内分泌细胞分泌的高效生物活性物质,在体内作为信使传递信息,对机体生理过程起调节作用的物质。按照化学组成,可以分为类固醇、氨基酸衍生物、肽与蛋白质和脂肪酸衍生物4大类;按照来源,激素可以分为内源性激素和外源性激素。内源性激素是由自身体内腺体或细胞分泌的激素,分为生长激素和性激素,如雌二醇、雌三醇、孕酮、睾酮等。

外源性激素是人工合成的激素,可以分为性激素、促生长激素、间羟基苯酸丙酯和β-兴奋剂,如己烯雌酚、玉米赤霉醇、克伦特罗等都属于外源性激素。

为了维持动物正常的新陈代谢和生理功能,动物机体和组织都需要这种天然微量的性激素。内源性激素的水平受动物品种、年龄、生理变化,包括饲料以及气候、季节的影响而不断地变化。专家们普遍认为,牛乳中天然含有微量内源性的性激素,但不会对人体的健康产生危害,牛乳中的微量内源性激素是动态变化的,不构成食品安全威胁。目前,国内外都没有制定牛乳中内源性激素限量的标准,一般情况下不作为常规的检测指标。

乳制品激素检测

乳制品激素检测广泛应用的技术-酶联免疫法

乳制品激素残留浓度极低,激素的分析属复杂基质中痕量组分的分析技术,这种痕量分析具有检测限低,样品基质复杂,干扰物质多等特点,样品前处理技术复杂,检测难度大。目前,国际上针对激素的检测方法主要包括仪器方法、酶联免疫方法和生物芯片法。今天我们主要来分析酶联免疫法。

酶联免疫法(ELISA)现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 ,它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。
酶联免疫法的基本原理
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:
①固相的抗原或抗体
②酶标记的抗原或抗体
③酶作用的底物(显色剂)。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。

酶联免疫法是以抗原抗体的特异性结合及酶与底物的显色反应为基础的检测方法。酶联免疫可以定量检测乳制品等多种样品中的激素残留,操作简单、灵敏度高、特异性强、回收率高、检测速度快,可在2小时内完成检测,且检测成本低,非常适合批量检测。

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